HPLC کی ناکامیوں اور حلوں کا سب سے زیادہ شکار

ایک اعلی درستگی والے آلے کے طور پر، HPLC آسانی سے کچھ پریشان کن چھوٹے مسائل کا باعث بن سکتا ہے اگر اسے استعمال کے دوران درست طریقے سے نہیں چلایا جاتا ہے۔سب سے عام مسائل میں سے ایک کالم کمپریشن کا مسئلہ ہے۔ناقص کرومیٹوگراف کو جلدی سے کیسے حل کریں۔HPLC نظام بنیادی طور پر ایک ذخائر کی بوتل، ایک پمپ، ایک انجیکٹر، ایک کالم، ایک کالم درجہ حرارت چیمبر، ایک ڈیٹیکٹر اور ڈیٹا پروسیسنگ سسٹم پر مشتمل ہوتا ہے۔پورے نظام کے لیے، ستون، پمپ اور ڈٹیکٹر اہم اجزاء اور اہم مقامات ہیں جو مسائل کا شکار ہیں۔

کالم پریشر کی کلید وہ علاقہ ہے جس پر HPLC استعمال کرتے وقت پوری توجہ کی ضرورت ہوتی ہے۔کالم کے دباؤ کا استحکام کرومیٹوگرافک چوٹی کی شکل، کالم کی کارکردگی، علیحدگی کی کارکردگی اور برقرار رکھنے کے وقت سے گہرا تعلق رکھتا ہے۔کالم کے دباؤ کے استحکام کا مطلب یہ نہیں ہے کہ دباؤ کی قدر ایک مستحکم قدر پر مستحکم ہے، بلکہ یہ کہ دباؤ کے اتار چڑھاؤ کی حد 345kPa یا 50PSI کے درمیان ہے (کالم کا دباؤ مستحکم ہونے اور آہستہ آہستہ تبدیل ہونے پر گریڈینٹ ایلیوشن کے استعمال کی اجازت دیتا ہے)۔بہت زیادہ یا بہت کم دباؤ کالم پریشر کا مسئلہ ہے۔

HPLC کی ناکامیوں اور حلوں کا سب سے زیادہ شکار

1، ہائی پریشر HPLC کے استعمال میں سب سے عام مسئلہ ہے۔اس کا مطلب ہے دباؤ میں اچانک اضافہ۔عام طور پر، مندرجہ ذیل وجوہات ہیں: (1) عام طور پر، یہ بہاؤ چینل کی رکاوٹ کی وجہ سے ہے.اس موقع پر، ہمیں اس کی جانچ پڑتال کرنا چاہئے.aسب سے پہلے، ویکیوم پمپ کے داخلے کو کاٹ دیں۔اس مقام پر، PEEK ٹیوب مائع سے بھری ہوئی تھی تاکہ PEEK ٹیوب سالوینٹ کی بوتل سے چھوٹی ہو تاکہ یہ دیکھا جا سکے کہ آیا مائع اپنی مرضی سے ٹپک رہا ہے۔اگر مائع ٹپک نہیں رہا ہے یا آہستہ آہستہ نہیں ٹپک رہا ہے تو، سالوینٹ فلٹر ہیڈ بلاک ہو جاتا ہے۔علاج: 30% نائٹرک ایسڈ میں آدھے گھنٹے تک بھگو دیں اور انتہائی صاف پانی سے دھولیں۔اگر مائع بے ترتیب طور پر ٹپکتا ہے تو، سالوینٹس فلٹر ہیڈ نارمل ہے اور اسے چیک کیا جا رہا ہے۔بپرج والو کو کھولیں تاکہ موبائل کا مرحلہ کالم سے نہ گزرے، اور اگر دباؤ نمایاں طور پر کم نہ ہو تو فلٹر وائٹ ہیڈ بلاک ہو جاتا ہے۔علاج: فلٹر شدہ وائٹ ہیڈز کو ہٹا دیا گیا اور آدھے گھنٹے کے لیے 10% isopropanol کے ساتھ سونیکیٹ کیا گیا۔یہ فرض کرتے ہوئے کہ دباؤ 100PSI سے نیچے گرتا ہے، فلٹر شدہ وائٹ ہیڈ نارمل ہے اور اسے چیک کیا جا رہا ہے۔cکالم کے باہر نکلنے والے سرے کو ہٹا دیں، اگر دباؤ کم نہیں ہوتا ہے، تو کالم بلاک ہوجاتا ہے۔علاج: اگر یہ بفر نمک کی رکاوٹ ہے تو، دباؤ کو نارمل ہونے تک 95 فیصد کللا کریں۔اگر رکاوٹ کچھ زیادہ محفوظ مواد کی وجہ سے ہوتی ہے، تو عام دباؤ کی طرف تیزی سے بڑھنے کے لیے موجودہ موبائل فیز سے زیادہ مضبوط بہاؤ استعمال کیا جانا چاہیے۔اگر اوپر کے طریقہ کار کے مطابق طویل مدتی صفائی کا دباؤ کم نہیں ہوتا ہے تو، کالم کے ان لیٹ اور آؤٹ لیٹ کو اس کے برعکس آلہ سے منسلک سمجھا جا سکتا ہے، اور کالم کو موبائل فیز سے صاف کیا جا سکتا ہے۔اس وقت، اگر کالم کا دباؤ اب بھی کم نہیں ہوتا ہے تو، کالم کے داخلی دروازے کی چھلنی پلیٹ کو صرف تبدیل کیا جا سکتا ہے، لیکن ایک بار جب آپریشن اچھا نہیں ہوتا ہے، تو کالم کے اثر کو کم کرنا آسان ہے، لہذا کم استعمال کرنے کی کوشش کریں۔مشکل مسائل کے لیے، کالم کی تبدیلی پر غور کیا جا سکتا ہے۔

(2) غلط بہاؤ کی شرح کی ترتیب: درست بہاؤ کی شرح کو دوبارہ ترتیب دیا جا سکتا ہے۔

(3) غلط بہاؤ کا تناسب: بہاؤ کے مختلف تناسب کا viscosity انڈیکس مختلف ہے، اور زیادہ viscosity کے ساتھ بہاؤ کا متعلقہ سسٹم پریشر بھی بڑا ہے۔اگر ممکن ہو تو، کم وسکوسیٹی سالوینٹس کو تبدیل کیا جا سکتا ہے یا دوبارہ سیٹ کر کے تیار کیا جا سکتا ہے۔

(4) سسٹم پریشر صفر بڑھے: مائع لیول سینسر کے صفر کو ایڈجسٹ کریں۔

2، دباؤ بہت کم ہے (1) عام طور پر سسٹم کے رساو کی وجہ سے ہوتا ہے۔کیا کرنا ہے: ہر کنکشن تلاش کریں، خاص طور پر کالم کے دونوں سروں پر انٹرفیس، اور لیک ایریا کو سخت کریں۔پوسٹ کو ہٹا دیں اور مناسب طاقت کے ساتھ PTFE فلم کو سخت یا لائن کریں۔

(2) گیس پمپ میں داخل ہوتی ہے، لیکن دباؤ اس وقت عام طور پر غیر مستحکم ہوتا ہے، اونچا اور کم۔زیادہ سنجیدگی سے، پمپ سیال کو جذب نہیں کر سکے گا۔علاج کا طریقہ: کلیننگ والو کو کھولیں اور 3~5ml/منٹ کی بہاؤ کی شرح سے صاف کریں۔اگر نہیں تو، ایک سرشار سوئی ٹیوب کا استعمال کرتے ہوئے ایگزاسٹ والو پر ہوا کے بلبلوں کی خواہش کی گئی تھی۔

(3) موبائل فیز کا اخراج نہیں: چیک کریں کہ آیا ریزروائر بوتل میں موبائل فیز ہے، آیا سنک موبائل فیز میں ڈوبا ہوا ہے، اور آیا پمپ چل رہا ہے۔

(4) حوالہ والو بند نہیں ہے: حوالہ والو سست ہونے کے بعد بند ہے۔یہ عام طور پر 0.1 تک نیچے جاتا ہے۔حوالہ والو بند کرنے کے بعد ~ 0.2mL/ منٹ۔

خلاصہ:

اس مقالے میں، مائع کرومیٹوگرافی میں صرف عام مسائل کا تجزیہ کیا گیا ہے۔بلاشبہ، ہمارے عملی اطلاق میں، ہمیں مزید دیگر مسائل کا سامنا کرنا پڑے گا۔غلطی سے نمٹنے میں، ہمیں درج ذیل اصولوں پر عمل کرنا چاہیے: فرضی عنصر اور مسئلے کے درمیان تعلق کا تعین کرنے کے لیے ایک وقت میں صرف ایک عنصر کو تبدیل کریں۔عام طور پر، خرابیوں کا سراغ لگانے کے لیے پرزوں کو تبدیل کرتے وقت، ہمیں ضائع ہونے سے بچنے کے لیے ٹوٹے ہوئے پرزوں کو دوبارہ جگہ پر رکھنے پر توجہ دینی چاہیے۔ایک اچھی ریکارڈ کی عادت بنانا غلطی سے نمٹنے کی کامیابی کی کلید ہے۔آخر میں، HPLC کا استعمال کرتے وقت، نمونہ سے پہلے علاج اور آلات کے مناسب آپریشن اور دیکھ بھال پر توجہ دینا ضروری ہے۔