ریکومبیننٹ پروٹین اینٹیجنز میں اکثر کئی مختلف ایپیٹوپس ہوتے ہیں، جن میں سے کچھ تسلسل ایپیٹوپس ہوتے ہیں اور کچھ ساختی ایپیٹوپس ہوتے ہیں۔پولی کلونل اینٹی باڈیز جو ڈینیچرڈ اینٹیجنز کے ساتھ جانوروں کو حفاظتی ٹیکوں سے حاصل کی جاتی ہیں انفرادی ایپیٹوپس کے لیے مخصوص اینٹی باڈیز کا مرکب ہوتے ہیں اور انہیں عام طور پر قدرتی ڈھانچے یا منحرف ٹارگٹ پروٹینز کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔منحرف پروٹین کو امیونوجن کے طور پر استعمال کرنے کا ایک ضمنی فائدہ یہ ہے کہ منحرف پروٹین زیادہ امیونوجینک ہوتے ہیں اور جانوروں میں مضبوط مدافعتی ردعمل کو متحرک کرسکتے ہیں۔
Escherichia coli کے اظہار کا نظام عام طور پر اینٹی جینک مقاصد کے لیے منتخب کیا جاتا ہے کیونکہ یہ وقت اور پیسے کے لحاظ سے سب سے مہنگا نظام ہے۔ہدف پروٹین کے اظہار کے امکان اور طہارت کی سہولت کو بہتر بنانے کے لیے، بعض اوقات ہدف پروٹین کا صرف ایک چھوٹا سا ٹکڑا، جیسے کہ ایک مخصوص ڈومین، کا اظہار کیا جاتا ہے۔
پروٹین کی تین جہتی ساخت
ایک پروٹین کا مخصوص ڈومین
اگر اینٹی باڈی کی تیاری کا مقصد صرف ڈبلیو بی کا پتہ لگانا ہے، تو مصنوعی چھوٹے پیپٹائڈ کو اینٹیجن کے طور پر استعمال کرنا اقتصادی اور تیز رفتار ہے، لیکن پیپٹائڈ سیگمنٹ کے نامناسب انتخاب کی وجہ سے کمزور مدافعتی یا عدم بحالی کا خطرہ ہے۔چونکہ اینٹی باڈی کی تیاری میں طویل مدت درکار ہوتی ہے، اس لیے تجربے کی کامیابی کی شرح کو یقینی بنانے کے لیے پولی پیپٹائڈ اینٹیجن کا استعمال کرتے ہوئے اینٹی باڈیز تیار کرنے کے لیے اکثر دو یا تین مختلف پیپٹائڈ سیگمنٹس کا انتخاب کیا جاتا ہے۔
حفاظتی ٹیکوں کے لیے پولی پیپٹائڈ اینٹیجن کی پاکیزگی کا 80% سے زیادہ ہونا ضروری ہے۔اگرچہ زیادہ پاکیزگی نظریاتی طور پر بہتر مخصوصیت کے ساتھ اینٹی باڈیز حاصل کر سکتی ہے، لیکن عملی طور پر، جانور ہمیشہ غیر مخصوص اینٹی باڈیز کی ایک بڑی تعداد پیدا کرتے ہیں، اس طرح اینٹیجن کی پاکیزگی کے فوائد کو چھپاتے ہیں۔
اس کے علاوہ، چھوٹے پیپٹائڈس سے اینٹی باڈیز کی تیاری کو مناسب کیریئر اینٹیجن سے جوڑا جانا چاہیے تاکہ اس کی مدافعتی صلاحیت کو بڑھایا جا سکے۔دو عام اینٹی جینک کیریئرز KLH اور BSA ہیں۔
پوسٹ ٹائم: مارچ 23-2023