FRET پیپٹائڈ ٹیکنالوجی

فلوروسینس گونج توانائی کی منتقلی (FRET)

فلوروسینس ریزوننس انرجی ٹرانسفر (FRET) ایک غیر تابکاری توانائی کی منتقلی کا عمل ہے جس میں عطیہ دہندہ پرجوش ریاستی توانائی کو انٹرمولیکیولر برقی جوڑوں کے تعامل کے ذریعے قبول کنندہ پرجوش حالت میں منتقل کیا جاتا ہے۔اس عمل میں فوٹون شامل نہیں ہوتے ہیں اور اس لیے یہ غیر تابکاری ہے۔اس پرکھ کے تیز، حساس اور سادہ ہونے کے فوائد ہیں۔

FRET پرکھ میں استعمال ہونے والا رنگ ایک جیسا ہو سکتا ہے۔لیکن زیادہ تر ایپلی کیشنز میں، مختلف رنگوں کو اصل میں استعمال کیا جاتا ہے.مختصراً، برائٹ گونج والی توانائی کی منتقلی ڈونر (ڈائی 1) سے ڈونر (ڈائی 2) سے قبول کنندہ (ڈائی 2) کی طرف منتقلی ہے جب ڈونر گروپ پرجوش ہوتا ہے۔عام طور پر، ڈونر فلوروفور گروپ کا اخراج سپیکٹرم قبول کرنے والے گروپ کے جذب سپیکٹرم کے ساتھ اوورلیپ ہوتا ہے۔"جب دو فلوروفورس کے درمیان فاصلہ مناسب ہو (10 - 100 A)، تو عطیہ دہندہ سے قبول کنندہ تک فلوروفور توانائی کی منتقلی کا مشاہدہ کیا جا سکتا ہے۔"توانائی کی منتقلی کا طریقہ رسیپٹر کی کیمیائی ساخت پر منحصر ہے:

1. مالیکیولر وائبریشن میں تبدیل ہو جاتا ہے، یعنی توانائی کی منتقلی کی چمکیلی روشنی غائب ہو جاتی ہے۔(رسیپٹر ایک روشنی بجھانے والا ہے)

2. اخراج خود ریسیپٹر سے زیادہ شدید ہوتا ہے، جس کے نتیجے میں ثانوی فلوروسینس سپیکٹرم میں ریڈ شفٹ ہوتا ہے۔(رسیپٹرز برائٹ ایمیٹرز ہیں)۔

ڈونر گروپ (EDANS) اور قبول کرنے والا جین (DABCYL) HIV پروٹیز کے قدرتی ذیلی ذخیرے سے یکساں طور پر جڑے ہوئے ہیں، اور جب سبسٹریٹ منقطع نہیں ہوتا ہے، DABCYL EDANS کو بند کر سکتا ہے اور پھر فلورین کے لیے ناقابل شناخت ہو جاتا ہے۔HIV-1 پروٹیز منقطع ہونے پر، DABCYL کے ذریعے EDANS کو بجھایا نہیں جاتا، اور EDANS luciferases کا بعد میں پتہ لگایا جا سکتا ہے۔EDANS کی فلوروسینس کی شدت میں تبدیلیوں کے ذریعے پروٹیز انحیبیٹرز کی دستیابی کی نگرانی کی جا سکتی ہے۔

FRET پیپٹائڈس پیپٹائڈیس کی غیر مخصوصیت کا مطالعہ کرنے کے لیے آسان ٹولز ہیں۔چونکہ اس کے ردعمل کے عمل کی مسلسل نگرانی کی جا سکتی ہے، اس لیے یہ انزائم کی سرگرمی کا پتہ لگانے کے لیے ایک آسان طریقہ فراہم کرتا ہے۔عطیہ کنندہ / قبول کنندہ کے ذریعہ پیپٹائڈ بانڈز کے ہائیڈولیسس کے بعد پیدا ہونے والی شین نانومولر ارتکاز پر انزائم کی سرگرمی کا ایک پیمانہ فراہم کرتی ہے۔جب FRET پیپٹائڈ برقرار ہوتا ہے، تو یہ اندرونی فلیش کے اچانک غائب ہونے کو ظاہر کرتا ہے، لیکن جب عطیہ کنندہ/قبول کرنے والے کے مخالف کوئی پیپٹائڈ بانڈ ٹوٹ جاتا ہے، تو یہ ایک فلیش جاری کرتا ہے، جس کا مسلسل پتہ لگایا جا سکتا ہے اور پھر انزائم کی سرگرمی کی مقدار درست کی جا سکتی ہے۔